联系华中航
生物医学仪器流式细胞仪的计量校准与性能检测方法
2025-12-01 11:32
流式细胞术作为现代生物医学研究的核心利器，能够在高速流动中对细胞或微粒进行多参数、定量分析。其结果的可靠性直接关系到科学发现的准确性、临床诊断的精确度以及药物研发的成败。而确保这份可靠性的关键，就在于对流式细胞仪进行系统、规范的计量校准与性能检测。
一、 为何校准至关重要：从“看到”到“测准”
未经校准的流式细胞仪如同一把刻度模糊的尺子，虽然能比较大小，却无法给出精确的数值。其检测结果可能因光学系统衰减、液流波动、电子信号漂移等因素而产生偏差。计量校准的核心目的，就是通过一系列标准化的程序，确保仪器：
量值准确性： 保证荧光强度、细胞大小等物理量的测量结果准确、可溯源至国际或国家标准，实现不同时间、不同仪器间数据的可比性。
分辨率与灵敏度： 确认仪器能否有效区分信号与噪声，并清晰分辨出荧光强度差异微弱的细胞群体。
状态监控与预警： 定期检测可以追踪仪器性能的长期变化趋势，及时发现潜在故障，防患于未然。
二、 校准检测的核心内容与流程
流式细胞仪的校准检测是一个系统工程，主要围绕光路、液路和电路三大核心展开。
光路校准：
光学校准： 使用标准化的微球（如Alignment Beads）优化激光与荧光收集光路，确保激光光斑与液流交汇点处于最佳位置，从而获得最强的信号和最高的灵敏度。
荧光强度校准： 这是最关键的一步。使用带有已知分子当量荧光素（MESF）的校准微球，建立荧光通道信号强度与荧光分子数量之间的定量关系。通过它，可以将仪器测得的相对荧光强度转化为绝对定量数值。
液路系统校准：
流速校准： 对于需要进行绝对细胞计数的应用（如CD4+ T细胞计数），必须精确校准样本流速。通过测量在特定时间内仪器消耗的样本体积，来计算并校准实际流速，确保计数结果的准确性。
电子信号校准与性能验证：
电压设置与线性度： 使用携带单一明亮荧光素的微球，检查光电倍增管（PMT）电压设置是否在线性工作区间，避免信号饱和或过弱。
灵敏度检测： 通常使用“可溶性等价荧光分子数（MESF）”来衡量。通过测量一系列荧光强度递减的微球，计算每个通道的检测下限，确保其能检测到低表达抗原的微弱信号。
光谱重叠补偿： 虽然日常实验需要根据荧光染料自行调节，但在校准中会使用多色补偿微球，验证各检测器之间的光谱重叠补偿功能是否正常，确保多色分析的纯净度。
三、 实施规范的校准策略
一个完善的质控体系应包括：
日常校准/质控： 在每次实验前，使用校准/质控微球快速验证仪器的状态是否稳定，确保当日数据的可靠性。
定期全面校准： 根据使用频率和制造商的建议，定期（如每季度或每半年）进行一次全面的性能验证与校准，并生成详细的校准报告。
故障后或重大维修后校准： 在仪器经过维修，尤其是光路或液路部件更换后，必须重新进行全面校准。
流式细胞仪的计量校准检测绝非可有可无的例行公事，而是保障数据质量的生命线。它将该技术从一种定性的观察工具，提升为一种强大的定量分析平台。在精准医学日益发展的今天，建立并严格执行标准化的校准流程，是每一位流式细胞仪使用者获得可信结果、做出科学决策的坚实基础。
上一页：
